明日叶查尔酮对２型糖尿病大鼠血清ＥＴ－１和ＶＥ－ｃａ影响

研究地点：青岛大学医学院营养研究所，山东青岛，２６６０２１

摘   要

目的

研究明日叶查尔酮（ＡＣ）对２型糖尿病大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用。

方法

将用高脂饲料喂养加链脲佐菌素腹腔注射诱发的２型糖尿病动物模型，随机分为糖尿病对照组和高、中、低剂量ＡＣ组，每组１０只。糖尿病对照组喂饲高脂饲料并经口灌胃蒸馏水，高、中、低剂量ＡＣ组分别经口灌胃３０、１０和５ｍｇ／ｋｇＡＣ，正常对照组给予普通饲料，连续４周后测定各组血清内皮素－１、钙黏蛋白、丙二醛、空腹血糖和血清胰岛素等水平的变化。

结果

与糖尿病对照组比较，高剂量ＡＣ组内皮素－１和钙黏蛋白的含量降低，空腹血糖和血清胰岛素水平降低，差异均有显著性（Ｆ＝４．５８～４８．２９，ｑ＝３．４５～１４．９４，Ｐ＜０．０５）。

结论

ＡＣ可降低２型糖尿病大鼠血清内皮素－１和钙黏蛋白的水平，对血管内皮细胞的损伤有保护作用。

关键词：明日叶查尔酮；２型糖尿病；内皮缩血管肽类；桥粒钙黏蛋白质类

 

明日叶是一种原产于日本八丈诸岛野生芹科植物，明日叶查尔酮（ＡＣ）是明日叶的主要功效成分，具有提高机体免疫力、延缓衰老等多种功效，在抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病等方面具有良好作用。研究证明，ＡＣ具有胰岛素样抗糖尿病活性，诱导葡萄糖转运体移位，起到降血糖的作用。但是目前尚未见有ＡＣ对２型糖尿病病人血管内皮细胞影响的研究报道。本实验通过给予２型糖尿病大鼠不同剂量ＡＣ的方法，观察ＡＣ对２型糖尿病大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用。

 

１材料与方法

１．１材料

清洁级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只，体质量１６０~１８０ｇ，由山东鲁抗医药实验中心提供。

１．２实验样品

ＡＣ由本实验室制备，经紫外线分光光度法测定其纯度＞９０％。查尔酮标准品购于美国ＳＩＧＭＡ公司。

１．３仪器与试剂

ＴＤＬ－５离心机购于上海安亭科学仪器厂；电子天平为山海天平仪器厂产品；ＲｏｓｙｓＡｎｔｈｏｓ２０１０型双波长酶标仪为深圳雷杜生命科学股份有限公司产品；内皮素（ＥＴ）放射免疫分析试剂盒、碘［１２５Ｉ］胰岛素放射免疫分析试剂盒购于北京北方生物技术研究所；大鼠血管内皮钙黏蛋白（ＶＥ－ｃａ）和丙二醛（ＭＤＡ）试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

１．４实验方法

１．４．１模型制备

用高脂饲料（由北京华阜康生物科技股份有限公司提供）喂养并腹腔注射小剂量链脲佐菌素的方法制备２型糖尿病大鼠模型。自给予高脂饲料喂养的第２周起腹腔注射剂量为１５ｍｇ／ｋｇ体质量的链脲佐菌素，每周１次，连用３周，以空腹血糖高于１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ者视为造模成功。正常对照组给予普通饲料喂养并腹腔注射等量的柠檬酸钠缓冲液。１．４．２动物分组及处理

将诱发的２型糖尿病动物模型随机分成４组，每组１０只。糖尿病对照组喂饲高脂饲料并经口灌胃蒸馏水，高、中、低剂量ＡＣ组喂饲高脂饲料并分别经口灌胃给予３０、１０、５ｍｇ／ｋｇ的ＡＣ，正常对照组（１０只）给予普通饲料并经口灌胃相同剂量的蒸馏水，连用４周。在末次灌胃后禁食１２ｈ，称体质量，尾尖采血测定空腹血糖。全部动物按５ｍＬ／ｋｇ经腹腔注射７０ｇ／Ｌ的水合氯醛麻醉后，打开腹腔，腹主动脉取血，分离血清备检。１．５检测指标

ＥＴ－１采用免疫放射分析法检测［５］。ＶＥ－ｃａ采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒检测，按照试剂盒说明书进行操作。血糖采用葡萄糖氧化酶法测定。血清胰岛素采用放射免疫法测定。ＭＤＡ采用硫代巴比妥酸比色法测定。

１．６统计分析

采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件对计量资料进行单因素方差分析，两两比较采用ｑ检验。

 

２结果

糖尿病对照组ＥＴ－１、ＶＥ－ｃａ、ＭＤＡ、血糖、胰岛素含量高于正常对照组，差异均有显著意义（Ｆ＝４．５８～４８．２９，ｑ＝４．３６～１４．９４，Ｐ＜０．０５）。高剂量ＡＣ组的ＥＴ－１、ＶＥ－ｃａ、ＭＤＡ、血糖、胰岛素含量均低于糖尿病对照组、低剂量ＡＣ组、中剂量ＡＣ组，差异均有显著性（ｑ＝３．０２～１２．１１，Ｐ＜０．０５）；而与正常对照组比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结果见表１。

３讨论

血管病变是２型糖尿病的主要并发症，血管内皮损伤是导致糖尿病血管病变机制之一。血管内皮细胞具有高度的代谢和分泌活性，能感知炎性信号和分泌活性物质。受损后的血管内皮细胞可发生功能障碍，导致分泌功能失调和分泌的多种活性物质之间失衡。内皮细胞功能障碍与心脑血管疾病，特别是动脉粥样硬化的形成密切相关。

国内外很多研究结果表明，２型糖尿病病人存在血管内皮功能障碍，高浓度葡萄糖可诱导血管内皮细胞功能的异常。

ＡＣ属黄酮类化合物，其化学结构为１，３－二苯基丙烯酮。研究证明，ＡＣ具有抗糖尿病、降血糖的作用。

本研究结果显示，糖尿病对照组的空腹血糖和胰岛素水平均显著高于正常对照组，表明成功诱发了２型糖尿病大鼠模型。高剂量ＡＣ组的空腹血糖和胰岛素均低于糖尿病对照组，提示ＡＣ能降低２型糖尿病大鼠的血糖和胰岛素水平，改善其胰岛素抵抗状况。ＥＴ－１是血管内皮细胞分泌的具有强大缩血管和促进细胞分裂的肽类物质，可以增加血管通透性，促进血管平滑肌细胞增殖和迁移。在正常情况下，ＥＴ－１和一氧化氮这对拮抗因子保持细胞的舒缩平衡。当血管内皮细胞受到损伤，这种平衡就会被打破。糖尿病病人血清ＥＴ－１水平可明显升高。

本研究结果显示，糖尿病对照组大鼠血清ＥＴ－１水平高于正常对照组，提示其血管内皮细胞受到损伤。高剂量ＡＣ组血清ＥＴ－１水平低于糖尿病对照组，表明ＡＣ对大鼠血管内皮细胞的损伤具有保护作用。ＶＥ－ｃａ能保持细胞的完整性和极性。

国外研究显示，ＶＥ－ｃａ水平是反映血管内皮细胞损害的有效指标。王占华等研究显示，晚期糖基化终产物可引起ＶＥ－ｃａ分布和形态改变。本研究结果显示，糖尿病对照组血清ＶＥ－ｃａ浓度明显高于正常对照组，而高剂量ＡＣ组则低于糖尿病对照组，说明２型糖尿病大鼠血管内皮已受到损害，ＡＣ对２型糖尿病大鼠血管内皮的损伤具有保护作用。

本实验结果亦显示，糖尿病对照组ＭＤＡ水平较正常对照组升高，而高剂量ＡＣ组则较糖尿病对照组降低，提示ＡＣ对抑制糖尿病大鼠脂质过氧化有一定作用，这也可能是ＡＣ对２型糖尿病大鼠血管内皮细胞损伤具有一定保护作用的机制所在。